Rengt Saposhnikovia divaricata Ueleg fir Käerzen- a Seefenherstellung Grousshandel Diffusor ätherescht Ueleg nei fir Rietbrenner Diffusoren
kuerz Beschreiwung:
2.1. Virbereedung vun der SDE
D'Rhizome vum SD goufen als gedréchent Kraut vun der Hanherb Co. (Guri, Korea) kaaft. D'Planzematerial gouf taxonomesch vum Dr. Go-Ya Choi vum Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM) bestätegt. E Gutscheinprobe (Nummer 2014 SDE-6) gouf am koreanesche Herbarium vu Standard Herbal Resources deposéiert. Gedréchent Rhizome vum SD (320 g) goufen zweemol mat 70% Ethanol (mat 2 Stonnen Reflux) extrahéiert an den Extrakt gouf duerno ënner reduzéiertem Drock konzentréiert. D'Dekoktioun gouf gefiltert, lyophiliséiert a bei 4°C gelagert. D'Ausbezuelung vum gedréchenten Extrakt aus réien Ausgangsmaterialien war 48,13% (w/w).
2.2. Quantitativ Analyse vun der Héichleistungsflëssegkeetschromatographie (HPLC)
Chromatographesch Analyse gouf mat engem HPLC-System (Waters Co., Milford, MA, USA) an engem Photodioden-Array-Detektor duerchgefouert. Fir d'HPLC-Analyse vun SDE gouf de Prim-O-de Glucosylcimifugin-Standard gouf vum Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea) kaaft, ansec-O-Glucosylhamaudol an 4′-O-β-D-Glucosyl-5-O1-Methylvisamminol goufen an eisem Laboratoire isoléiert an duerch Spektralanalysen, haaptsächlech duerch NMR an MS, identifizéiert.
SDE-Prouwen (0,1 mg) goufen an 70% Ethanol (10 ml) opgeléist. Chromatographesch Trennung gouf mat enger XSelect HSS T3 C18 Kolonn (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Déi mobil Phase bestoung aus Acetonitril (A) an 0,1% Essigsäure a Waasser (B) mat enger Duerchflussrate vun 1,0 mL/min. E Méistuf-Gradientprogramm gouf wéi follegt benotzt: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) an 20–65% A (23–40 min). D'Detektiounswellelängt gouf bei 210–400 nm gescannt an bei 254 nm opgeholl. Den Injektiounsvolumen war 10,0μL. Standardléisunge fir d'Bestimmung vun dräi Chromonen goufen an enger Endkonzentratioun vun 7,781 mg/ml (primär) virbereet.O-Glucosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-Glucosyl-5-O-methylvisaminol), an 31,125 mg/ml (sec-O-Glucosylhamaudol) a Methanol gelagert a bei 4°C gelagert.
2.3. Evaluatioun vun der entzündungshemmender AktivitéitIn vitro
2.3.1. Zellkultur a Proufbehandlung
RAW 264.7 Zellen goufen aus der American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) kritt a goufen an DMEM-Medium mat 1% Antibiotike a 5,5% FBS ugebaut. D'Zellen goufen an enger befeuchteter Atmosphär mat 5% CO2 bei 37°C inkubéiert. Fir d'Zellen ze stimuléieren, gouf d'Medium duerch frësch DMEM-Medium a Lipopolysaccharid (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) bei 1 ersat.μg/mL gouf an der Präsenz oder am Absenz vun SDE bäigefüügt (200 oder 400μg/mL) fir weider 24 Stonnen.
2.3.2. Bestëmmung vu Stickstoffmonoxid (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumornekrosefaktor-α(TNF-α), an Interleukin-6 (IL-6) Produktioun
Zellen goufen mat SDE behandelt a fir 24 Stonnen mat LPS stimuléiert. D'NO-Produktioun gouf analyséiert andeems Nitrit mat dem Griess-Reagens geméiss enger fréierer Studie [12Sekretioun vun den entzündleche Zytokine PGE2, TNF-α, an IL-6 gouf mat engem ELISA-Kit (R&D Systems) no den Instruktioune vum Hiersteller bestëmmt. D'Auswierkunge vun SDE op d'NO- a Zytokinproduktioun goufen bei 540 nm oder 450 nm mat engem Wallac EnVision bestëmmt.™Mikroplackelieser (PerkinElmer).
2.4. Evaluatioun vun der AntiosteoarthritisaktivitéitIn Vivo
2.4.1. Déieren
Männlech Sprague-Dawley Ratten (7 Wochen al) goufen vun Samtako Inc. (Osan, Korea) kaaft an ënner kontrolléierte Konditioune mat engem 12-Stonne Liicht/Donkel-Zyklus ënnerbruecht.°C an% Loftfiichtegkeet. D'Ratten kruten eng Laborfudderung a Waasser.fräiwëllegAll experimentell Prozedure goufen am Aklang mat de Richtlinne vun den National Institutes of Health (NIH) duerchgefouert a vum Animal Care and Use Committee vun der Daejeon Universitéit (Daejeon, Republik Korea) guttgeheescht.
2.4.2. Induktioun vun OA mat MIA bei Ratten
D'Déiere goufen zoufälleg agedeelt an a Behandlungsgruppen zougewisen, ier d'Studie ugefaangen huet (pro Grupp). MIA-Léisung (3 mg/50μL vun 0,9% Salzléisung) gouf direkt an den intraartikuläre Raum vum rietse Knéi ënner Anästhesie induzéiert mat enger Mëschung aus Ketamin a Xylazin injizéiert. D'Ratte goufen zoufälleg a véier Gruppen opgedeelt: (1) d'Salzléisungsgrupp ouni MIA-Injektioun, (2) d'MIA-Grupp mat MIA-Injektioun, (3) d'SDE-behandelt Grupp (200 mg/kg) mat MIA-Injektioun, an (4) d'Indomethacin (IM-)-behandelt Grupp (2 mg/kg) mat MIA-Injektioun. Ratte kruten 1 Woch virun der MIA-Injektioun fir 4 Wochen oral SDE an IM verabreicht. D'Doséierung vun SDE an IM, déi an dëser Studie benotzt gouf, baséiert op deenen, déi a fréiere Studien benotzt goufen [10,13,14].
2.4.3. Miessunge vun der Gewiichtsverdeelung vun den hënneschte Patten
No der OA-Induktioun gouf dat ursprénglecht Gläichgewiicht an der Gewiichtsdroefäegkeet vun den hënneschte Patten gestéiert. En Inkapazitéitstester (Linton Instrumentation, Norfolk, UK) gouf benotzt fir d'Ännerungen an der Gewiichtsdroetoleranz ze evaluéieren. D'Ratte goufen virsiichteg an d'Miesskammer gesat. D'Gewiichtsdroekraaft, déi vum hënneschte Been ausgeübt gouf, gouf iwwer eng Period vun 3 Sekonnen gemittelt. D'Gewiichtsverdeelungsverhältnis gouf mat der folgender Equatioun berechent: [Gewiicht um rietsen hënneschte Been/(Gewiicht um rietsen hënneschte Been + Gewiicht um lénksen hënneschte Been)] × 100 [15].
2.4.4. Miessunge vun de Serumzytokinniveauen
D'Bluttproben goufen 10 Minutte laang bei 4°C bei 1.500 g zentrifugéiert; duerno gouf d'Serum gesammelt a bis zur Benotzung bei −70°C gelagert. D'Niveaue vun IL-1β, IL-6, TNF-α, an PGE2 am Serum goufen mat ELISA-Kits vun R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) no den Instruktioune vum Hiersteller gemooss.
2.4.5. Echtzäit quantitativ RT-PCR Analyse
Total RNA gouf aus dem Knéigelenkgewebe mat dem TRI-Reagens® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) extrahéiert, an cDNA reverstranskribéiert a mat engem TM One Step RT PCR Kit mat SYBR Green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) PCR-amplifizéiert. Echtzäit quantitativ PCR gouf mat dem Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) duerchgefouert. D'Primersequenzen an d'Probesequenz sinn an der Tabell gewisen.1Aliquote vu Prouf-cDNAen an eng gläich Quantitéit GAPDH-cDNA goufen mat der TaqMan® Universal PCR-Mastermëschung mat DNA-Polymerase amplifizéiert, geméiss den Instruktioune vum Hiersteller (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). D'PCR-Konditioune waren 2 Minutten bei 50°C, 10 Minutten bei 94°C, 15 Sekonnen bei 95°C an 1 Minutt bei 60°C fir 40 Zyklen. D'Konzentratioun vum Zilgen gouf mat der komparativer Ct-Method (Schwellzyklusnummer um Kräizpunkt tëscht Amplifikatiounsplot an Schwell) bestëmmt, geméiss den Instruktioune vum Hiersteller.
Osteoarthritis (OA) ass déi heefegst Stéierung vum Bewegungsapparat an déi heefegst degenerativ Gelenkerkrankung bei eelere Leit [1]. Arthrose ass eng Krankheet, déi deelweis duerch Verletzungen, Verloscht vun der Knorpelstruktur a -funktioun, an Dysreguléierung vu proinflammatoreschen an antiinflammatoresche Weeër verursaacht gëtt [2,3Et betrëfft haaptsächlech de Gelenkknorpel an de subchondralen Knach vun de Synovialgelenker a féiert zu Gelenkversoen, wat zu Péng beim Gewiichtsdroen, dorënner beim Spazéieren a beim Stoen, féiert [4].
Et gëtt keng Heelung fir Arthrose, well et ganz schwéier ass, de Knorpel ze restauréieren, wann en zerstéiert ass [5D'Ziler vun der Behandlung sinn d'Linderung vu Péng, d'Gelenkmobilitéit z'erhalen oder ze verbesseren, d'Kraaft vun de Gelenker ze erhéijen an déi behënnerend Auswierkunge vun der Krankheet ze minimiséieren. Pharmakologesch Behandlungen vun Arthrose zielen drop of, Péng ze reduzéieren, fir d'Gelenkfunktioun an d'Liewensqualitéit vum Patient ze verbesseren. Och wann d'Knorpelzerstéierung dat Haaptevenement bei Arthrose ass, ass den Ofbau vum Kollagen de fundamentalen Evenement, deen déi irreversibel Progressioun vun Arthrose a Verbindung mat Entzündungen bestëmmt [6,7Et gëtt erwaart, datt Behandlungen mat entzündungshemmender an chondroprotektiver Aktivitéit Schmerzlinderung an d'Matrixintegritéit bei Arthrose-Patienten erhalen.
Dofir wäert d'Reduzéierung vun Entzündungen wahrscheinlech bei der Behandlung vun Arthrose virdeelhaft sinn. Rezent Studien suggeréieren eng schützend Roll vu Kräiderressourcen bei der Progressioun vun Arthrose, wat d'Linderung vun der Chondrozytenentzündung an der weiderer Knorpelzerstéierung ugeet, duerch hir Fäegkeet, mat Gelenkgewebe ze interagéieren, wat zu enger Linderung vu Gelenkschmerzen féiert [8].
D'Wuerzel vunSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) gëtt an der traditioneller Medizin a Korea a China wäit verbreet fir d'Behandlung vu Kappwéi, Péng, Entzündungen an Arthritis benotzt.9,10Déi verschidden pharmakologesch Effekter vunSaposhnikovia divaricata(SD) enthalen och entzündungshemmend, analgetesch, fiebersenkend an antiarthritesch Eegeschaften [9,11Eng rezent Studie huet gewisen, datt den SD-Chromonextrakt potenziell antirheumatoid Arthritis-Effekter an engem Mausmodell vun Kollagen-induzéierter Arthritis huet [10]; awer et goufen nëmme wéineg Studien duerchgefouert, déi d'anti-inflammatoresch an antiarthritis Aktivitéit vunSaposhnikovia divaricataExtrakt (SDE).
Dofir huet déi aktuell Studie déi entzündungshemmend an antiosteoarthritis Aktivitéite vun engem 70% Ethanol-Extrakt vun SD ënnersicht. Als éischt gouf den entzündungshemmend Effekt vun SDE evaluéiert.in vitroan LPS-induzéierten RAW 264.7 Zellen. Duerno gouf den Antiosteoarthritis-Effekt vun SDE gemooss andeems d'Gewiichtsverdeelung, den Ofbau vum Gelenkknorpel an d'entzündlech Reaktiounen an engem Rattemodell vun Mononatriumiodoacetat (MIA-) induzéierter OA bewäert gouf.